米兰官方站网页版和数明小讲堂 | 新冠核(hé)酸检测之PCR技术(shù)
疫情防(fáng)控(kòng)
科学(xué)防疫 米兰官方站网页版和数明(míng)有(yǒu)“芯”
当前上海正(zhèng)处于抗(kàng)新型冠状病(bìng)毒肺炎疫情防控(kòng)的关(guān)键阶段,在这个没(méi)有硝烟的战场(chǎng)上,及时(shí)快速(sù)地筛查(chá)新冠感染者并及时进行(háng)隔(gé)离是阻止新(xīn)冠病毒肆意蔓延的最有效且唯一的手段。核酸检测是目前筛查新冠感染者最精准(zhǔn)、有效、低成(chéng)本的(de)技(jì)术方(fāng)式。
什(shí)么(me)是PCR?
聚合酶链(liàn)式反应(Polymerase Chain Reaction), 简称PCR, 又称多聚(jù)酶链式(shì)反应,是一(yī)项(xiàng)利用DNA双链复(fù)制的原理,在生物体外复制特(tè)定DNA片段的核(hé)酸(suān)合成技(jì)术。透过这项技术,可在短时间内大量扩增目的基因,而不必依(yī)赖大肠杆菌或酵母菌(jun1)等生物体。
PCR扩增的(de)三个基本步骤
(1)变性(xìng):模板(bǎn)DNA经加热至94℃左(zuǒ)右并保持一定时间后(hòu),基于(yú)DNA半保留复制原理(lǐ),还有碱基互补配对(duì)原则,即(jí)复(fù)制的过程中双链DNA会(huì)解(jiě)链(liàn),由双(shuāng)链变成单链,为(wéi)下轮反应做准备;
(2)退火:模板DNA经加热变性成单链后(hòu),温度降至55℃左(zuǒ)右,引(yǐn)物与模板(bǎn)DNA单链的互补序列配(pèi)对结合;
(3)延伸:温(wēn)度再升至72℃左右,在DNA聚合酶(méi)的(de)作用下,把游离的dNTP按照碱基互补(bǔ)配对原则(zé)结合到单链上,形成一条由旧链和新链(liàn)杂合成的新的双(shuāng)链DNA。
PCR扩增原理:变形-退(tuì)火-延伸温(wēn)度循环
理论上,经过上面步(bù)骤,目(mù)标DNA浓度(dù)可增加一倍(bèi)。重复循环(huán)上(shàng)述过程,可获得更多的“半保留(liú)复制链”,而形(xíng)成的新链又可成(chéng)为(wéi)下次循环的模板。每完(wán)成(chéng)一个(gè)循环需(xū)2~4分钟, 仅需2~3小时就能将目标DNA扩(kuò)增放大几百万倍。
全自(zì)动(dòng)核酸提纯及实时荧光PCR分析系统
经(jīng)过以上分析,我(wǒ)们就可以(yǐ)理(lǐ)解为(wéi)什么核酸检测结果最(zuì)快能在几个小时内出结果。
实(shí)时荧光(guāng)PCR定量分析
PCR扩增(zēng)仪温度控(kòng)制指标主要(yào)有:温(wēn)度的准确性、均匀性、以及升降温速度。
1. 温度的准(zhǔn)确性:是指样品孔温度与设(shè)定(dìng)温度的一致性,它直接关系到实验(yàn)的成败。因而(ér)对PCR扩增仪而(ér)言温度控制就意(yì)味着产品质量。
2. 温度的均(jun1)匀性(xìng):是指样品孔(kǒng)间(jiān)的温度差异(yì),它关(guān)系到(dào)在不同样品孔(kǒng)进行(háng)反应结果的一致性。
3. 升降温速(sù)度(dù):更快的升降温速度(dù),可以有效缩短反应时间和可能(néng)的非特异性(xìng)结合、反应的时间,从而(ér)提高PCR反应特异性。
相(xiàng)较于传统的(de)相(xiàng)对稳定耐用(yòng)的(de)机械式,新的半导体(tǐ)温(wēn)控技术——TEC温(wēn)度控制技(jì)术(shù)具有(yǒu)升降(jiàng)温更快速的优(yōu)势,已经成为PCR扩(kuò)增仪的首(shǒu)选温度控制技(jì)术。
半导体制冷器 (Thermo Electric Cooler,简称 TEC) 是(shì)利(lì)用半导(dǎo)体材料的帕尔贴效应(yīng)制成的。如图下所示,帕尔(ěr)帖效应是指当直流电流(liú)通(tōng)过两种半导体材料组成的电偶时,其(qí)一端(duān)吸热,一端(duān)放(fàng)热(rè)的现象(xiàng)。TEC 包括一(yī)些(xiē) P 型和 N 型对(duì)(组),它们通过(guò)电极连在一起,并且(qiě)夹(jiá)在两个陶瓷电极之间,当有电流从(cóng) TEC 流过时,电流产生的热量会从 TEC 的 一侧传到另一侧(cè),在 TEC 上产生″热(rè)″侧和″冷″侧,这就是 TEC 的加热与(yǔ)致冷原理。
帕尔帖效应,PN 节以及热(rè)流动示意图
PCR扩增(zēng)仪一(yī)般具有两种温控(kòng)模式,即模块温控(kòng)模式(Block-control)和反应管温控(kòng)模(mó)式(shì)(tube-control)。管内样品的(de)温度无法与温控(kòng)模块(kuài)同时达到预设温度,特别是PCR反应中的(de)孵育过程一般为(wéi)30秒或更短,如果采用只有模块温控模式的话,反应混合物孵育的时间与程序设定(dìng)的时间会有相当大的差距(jù)。为(wéi)了达到反应管(guǎn)内部(bù)温度(dù)精确控制,需采用反(fǎn)应管控制模模式(shì),通过温度(dù)控(kòng)制算法进行参数标定和补偿(cháng),确(què)保反应混合物按照程序设(shè)定的时间(jiān)维持预设温度。
科技战“疫”,米兰官方站网页版和数明(míng)在行动
面对近期(qī)香港、深圳(zhèn)、上(shàng)海等地奥密克戎的快(kuài)速扩散,核酸检测能力在数量和速度(dù)方(fāng)面都面临着极大的(de)考验。米兰官方站网页版和数明半(bàn)导体积极发挥了科技技(jì)术方(fāng)面的优势,组织技(jì)术专(zhuān)家研究PCR扩增(zēng)技术的优化解决方案,以功率器件门极驱动芯(xīn)片和TEC控(kòng)制器(qì)为(wéi)着(zhe)力点,优先保障芯片供应和交付,与客户一起助力抗疫,共克(kè)时艰。
米兰官方站网页版和数明半导体自(zì)研的20V-600V耐(nài)压全系列的低(dī)边(biān)、半桥、三相半桥等(děng)功率管门极驱动芯片(SLM2103S、SLM2136等)可用于驱动TEC,协助PCR扩增仪器客户快速、方便地完成系统设计,在当前半导体(tǐ)供应短缺时期,可(kě)以满足客户(hù)设计方案的快速变更、验证与量产。
600V耐压半桥功率(lǜ)器(qì)件驱动芯(xīn)片工作(zuò)示意图
600V耐压三相半桥(qiáo)功(gōng)率器(qì)件驱动芯(xīn)片工作示(shì)意(yì)图
米兰官方站网页版和数明半导(dǎo)体的(de)单芯片TEC控制器(qì)产品——SLM8833/8834/8835 集成了(le)TEC驱(qū)动电路、低温飘(piāo)高精度温度误差放大器及环路补偿电路、温度设定与传感电路,采用高效的单电感架构,实(shí)现更紧凑、更(gèng)高的转换效率及(jí)更低的(de)噪(zào)声(shēng);其中功率级(jí)集成了超(chāo)低阻(zǔ)抗的(de)MOSFET,损(sǔn)耗更(gèng)低寿(shòu)命更久;同时匹配模拟(nǐ)PID与数字PID两种温控(kòng)模式,以满(mǎn)足客(kè)户PCR扩增仪的小(xiǎo)型(xíng)化创新设计需求。
由SLM8834 构成(chéng)的 TEC 系统框图
模拟PID温控(kòng)器模(mó)式
数字PID温控模式